￠ 產(chǎn)品簡介：

DiR碘化物是一類長鏈的親脂性熒光染料，用于標(biāo)記細(xì)胞膜以及其他脂溶性生物結(jié)構(gòu)，DiR呈深紅色熒光，在水中熒光強(qiáng)度很弱，與細(xì)胞膜結(jié)合或者與親脂性生物分子結(jié)合時(shí)，其熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)。其具有高消光系數(shù)，極性依賴性熒光和短激發(fā)態(tài)壽命，應(yīng)用于細(xì)胞，染料在細(xì)胞質(zhì)膜內(nèi)橫向擴(kuò)散，導(dǎo)致整個(gè)細(xì)胞在其濃度下均勻染色。DiR 自身熒光背景較低，紅外熒光可以穿透細(xì)胞和組織，可以在活體成像中用來示蹤。

￠ 產(chǎn)品基本參數(shù)：

中文名稱：BLT DiR碘化物，DiR'[DiIC18(7)]

分子量（g/mol）：~1013.4

形態(tài)：固體粉末

純度：95+%

溶劑：DMSO/DMF/EtOH

激發(fā)波長：748 nm

發(fā)射波長：780 nm

￠ 使用方法：

1. 染色液制備

（1）配置DMSO或EtOH 儲(chǔ)存液：儲(chǔ)存液用DMSO或EtOH配置濃度1～5 mM。儲(chǔ)存液分裝儲(chǔ)存在-20 ℃或-80 ℃，避免反復(fù)凍融。

（2）工作液制備：根據(jù)染色體系用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，PBS）稀釋儲(chǔ)存液，配制濃度為1～5 μM的工作液。最佳染色的工作液濃度與細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)體系有關(guān)，可多次嘗試染色實(shí)驗(yàn)優(yōu)化，且工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。

2. 懸浮細(xì)胞染色

（1）加入適當(dāng)體積（300 μL）的染色工作液重懸細(xì)胞，染色細(xì)胞濃度可嘗試1×10⁶/mL。

（2）孵育細(xì)胞：在室溫或37 ℃環(huán)境避光孵育細(xì)胞，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。建議首次孵育細(xì)胞20 min，之后可優(yōu)化孵育時(shí)間，以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。

（3）清洗多余染料：孵育結(jié)束，以1000～1500 rpm離心細(xì)胞5 min，去除上清液，用緩沖液重復(fù)清洗操作三次，注意緩慢操作。

3. 貼壁細(xì)胞的染色

（1）將貼壁細(xì)胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。

（2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。

（3）在蓋玻片的一角加入適當(dāng)體積（300 μL）的染料工作液，輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。

（4）以相同懸浮細(xì)胞的孵育條件進(jìn)行孵育，及孵育時(shí)間優(yōu)化。

（5）吸干染料工作液，用培養(yǎng)液或緩沖液清洗蓋玻片3次以上。

注：本方案僅供參考，具體實(shí)驗(yàn)條件請(qǐng)研究人員依據(jù)自身項(xiàng)目進(jìn)行優(yōu)化。

4. 外泌體的染色

（1）用PBS稀釋存儲(chǔ)液，配制濃度為 50-100 μM 的染料工作液，建議加入外泌體懸浮液體積的1/10體積的染料工作液（如1mL內(nèi)含100 μL工作液）。

（2）加入染料工作液后將離心管蓋緊，通過渦旋振蕩器混勻 1 min，再放置于 37 °C避光孵育 30 min。

注：染色條件和外泌體濃度有關(guān)，可多次嘗試染色濃度和時(shí)間實(shí)驗(yàn)優(yōu)化。

（3）向孵育后的外泌體-染料復(fù)合物中加入10 mL的1X PBS混勻，，按照外泌體提取方法（離心或其他）再次提取外泌體，以去除多余染料，重懸沉淀物，沉淀即為染色后的外泌體。

5. 檢測(cè)條件

對(duì)于使用BLT小動(dòng)物活體成像系列，可選擇Ex/Em：745/820 nm，進(jìn)行檢測(cè)。

附表：

￠ 注意事項(xiàng):

1．為了您的自身安全，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)做好有效防護(hù)；

2．最佳染色的工作液濃度與細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)體系有關(guān)，可多次嘗試染色實(shí)驗(yàn)優(yōu)化，且工作液現(xiàn)配現(xiàn)用；

3．本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)！