| 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 售價 |
| FNK001 | 100T | ￥1380 |
| FNK002 | 500T | ￥3880 |
產(chǎn)品簡介
Firefly&NLuc Luciferase Reporter Gene Assay Kit首先以D-熒光素鉀鹽為底物來檢測Firefly熒光素酶報告基因的活性，之后在淬滅該螢光反應的同時，以新型底物HFFZ檢測NLuc熒光素酶報告基因的活性。該試劑盒具有靈敏度高、穩(wěn)定性好的特點，可在單個樣品中同時檢測Firefly熒光素酶和NLuc熒光素酶的活性，適用于雙報告基因檢測。
產(chǎn)品組分
組分編號 | 組分名稱 | 產(chǎn)品編號/規(guī)格 |
FNK001/100T | FNK002/500T |
FNK001-A/FNK002-A | 細胞裂解液 | 20 mL | 100 mL |
FNK001-B/FNK002-B | Firefly熒光素酶檢測試劑 | 10 mL | 50 mL |
FNK001-C/FNK002-C | NLuc熒光素酶檢測緩沖液 | 10 mL | 50 mL |
FNK001-D/FNK002-D | NLuc熒光素酶底物（50×） | 200 μL | 1 mL |
保存條件
干冰運輸；-20 ℃保存，6 個月有效；-80 ℃保存，一年有效。螢火蟲熒光素酶檢測試劑和NLuc熒光素酶底物（50×）建議 -80 ℃避光保存。
使用說明
1.裂解細胞：將細胞裂解液充分混勻后，按如下方式加入報告基因細胞裂解液，充分裂解細胞。
1) 對于貼壁細胞：吸盡細胞培養(yǎng)液后，參考下表加入適量的報告基因細胞裂解液；對于懸浮細胞：離心去上清后，參考下表加入適量報告基因細胞裂解液。
器皿類型 | 96孔板 | 48孔板 | 24孔板 | 12孔板 | 6孔板 |
細胞裂解液（微升/孔） | 100 | 150 | 200 | 300 | 500 |
冰上孵育5-10 min ，充分裂解細胞。
注：如果熒光素酶的表達水平比較低，可以嘗試使用更少的裂解液，例如6孔板的每孔用量可以最小為100微升。
2) 充分裂解后，10,000-15,000×g離心3-5分鐘，取上清用于測定。（選做）
注：細胞裂解后可以立即測定熒光素酶，也可以先凍存，待以后再測定。凍存樣品需融解，并達到室溫后再進行測定。裂解產(chǎn)物可在4 ℃保存12 h，-20 ℃/-80 ℃可長期存放。
2.試劑準備：
1) 融解Firefly熒光素酶檢測試劑和NLuc熒光素酶檢測緩沖液，并達到室溫。NLuc熒光素酶檢測底物(50×)置于冰浴或冰盒上備用。
注：螢火蟲熒光素酶檢測試劑建議分裝使用，盡量避免反復凍融。
2) 按照每個樣品需100 μL檢測液的量，取適量NLuc熒光素酶檢測緩沖液，按照1:50加入NLuc熒光素酶檢測底物(50×)配制成NLuc熒光素酶檢測工作液。
例如，980 μLNLuc熒光素酶檢測緩沖液中加入20 μLNLuc熒光素酶檢測底物(50×)充分混勻后即可配制成約1 mL NLuc熒光素酶檢測試劑。
注：NLuc熒光素酶檢測工作液建議現(xiàn)配現(xiàn)用，工作液配制后經(jīng)凍融再次使用可能會影響測試結(jié)果。
3.加樣檢測：
1) 取20 μL裂解液加至待檢測的96孔板中，按照實驗需求，可設置3-5個重復孔。
2) 加入100 μL螢火蟲熒光素酶檢測試劑，震板混勻，檢測螢火蟲熒光素酶的活力，檢測盡量在1小時內(nèi)完成。
3) 加入100 μL NLuc熒光素酶檢測試劑，震板混勻，檢測NLuc熒光素酶的活力，檢測盡量在1小時內(nèi)完成。
7.分析數(shù)據(jù)：
①實驗設計：根據(jù)不同實驗目的，在每個培養(yǎng)板中都應設置對照組、實驗組和空白對照組。為了保證實驗準確性，理論上每個實驗組（包括對照組）都應當減去空白對照組的螢火蟲和NLuc熒光素酶的發(fā)光測量值。
a.空白對照組：
背景F：未轉(zhuǎn)染細胞+Firefly熒光素酶檢測試劑。
背景R：未轉(zhuǎn)染細胞+Firefly熒光素酶檢測試劑+NLuc熒光素酶檢測試劑。
注：空白對照組的樣品量必須與實驗樣品量相同，包含與實驗樣品相同的培養(yǎng)基/血清組合，并加上完全相同的檢測試劑。
b.實驗組：轉(zhuǎn)染細胞經(jīng)實驗化合物處理(即實驗組F和實驗組R)。
c.對照組：轉(zhuǎn)染細胞不經(jīng)處理，用以標準化結(jié)果(即對照組F和對照組R)。
②計算結(jié)果：
實驗組比值=(實驗組F-背景F）/(實驗組R-背景R)。
對照組比值=(對照組F-背景F）/(對照組R-背景R)。
表達倍數(shù)=實驗組比值/對照組比值。
注意事項
1.反應溫度：酶促反應對溫度較為敏感，加樣檢測前務必將所有試劑平衡至室溫（20-25 ℃）再使用，可將裂解液、檢測試劑、檢測緩沖液在室溫或不超過25oC的水浴中融解并混勻后使用；
2.檢測儀器：能檢測化學發(fā)光的儀器都適用，但由于不同儀器的設置和靈敏度不同，測得的光信號值也會不同。對于同一樣品的檢測，不同儀器的數(shù)值不可橫向比較；
3.測定時間：樣品和測定試劑混合后即可進行測定，測定時間通常為1-10秒?yún)^(qū)間內(nèi)，增加檢測時長會同時增加樣本和本底的熒光讀值，根據(jù)實驗情況也可以測定更長或更短時間，但是同一批樣品宜使用相同的測定時間；
4.檢測板：為防止孔間干擾，推薦使用不透光白色酶標板。黑色酶標板也可用，但因黑色會吸收光信號，可能會降低信號；
5.通常加入NLuc熒光素酶檢測緩沖液后對上一步Firefly熒光素酶的抑制可達到99%以上，但可能殘留微量活性，因此在轉(zhuǎn)染時需將NLuc熒光素酶的表達量控制在其RLU讀值與螢火蟲熒光素酶相當或略高的水平。
6.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套；
7.本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)!