n 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

      該系列熒光染料是 TSA 技術(shù)的顯色試劑，可在組織或細(xì)胞的預(yù)期位置著色，染色結(jié)果可體現(xiàn)出所染靶標(biāo)的表達(dá)模式和豐度。本產(chǎn)品為10T/100T的100X 染料母液，使用時(shí)按照合適比例進(jìn)行稀釋，按照說(shuō)明書(shū)推薦使用可用10次/100次染色。

酪酰胺信號(hào)放大(TSA，Tyramide signal amplification)技術(shù)是一類利用辣根過(guò)氧化酶（HRP）對(duì)靶蛋白進(jìn)行標(biāo)記的酶學(xué)檢測(cè)方法，類似常規(guī)免疫組化的 DAB 顯色方法,TSA 技術(shù)同樣采用 HRP 標(biāo)記的二抗，同樣有對(duì)應(yīng)的“顯色”步驟(HRP 催化加入反應(yīng)體系的酪胺熒光素底物，產(chǎn)生活化熒光底物，活化底物可與抗原上的酪氨酸等殘基共價(jià)結(jié)合，使樣品上穩(wěn)定的共價(jià)結(jié)合酪胺熒光素。之后用熱修復(fù)法或者抗體洗脫液洗去非共價(jià)結(jié)合的一抗-二抗-HRP 復(fù)合物，重復(fù)下一種一抗-HRP二抗來(lái)第二輪孵育，換另一種酪胺熒光素底物，如此往復(fù)就可實(shí)現(xiàn)多重標(biāo)記。）

TSA 詳細(xì)原理是利用酪胺 Tyramide 的過(guò)氧化物酶反應(yīng)（酪胺鹽在 HRP 催化H₂O₂下形成共價(jià)鍵結(jié)合位點(diǎn)），產(chǎn)生大量的酶促產(chǎn)物，該產(chǎn)物能與周圍的蛋白殘基（包括色氨酸、組氨酸和酪氨酸殘基）結(jié)合，這樣在抗原-抗體結(jié)合部位就有大量的熒光素沉積，結(jié)果使其檢測(cè)信號(hào)得到10-100倍增強(qiáng)。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，用這種方法做多重免疫熒光是利用二抗上帶有的 HRP（而不是直接偶聯(lián)熒光素），來(lái)催化后續(xù)添加入體系的非活性熒光素。熒光素在 HRP 和過(guò)氧化氫的作用下被活化，跟臨近蛋白的酪氨酸殘基共價(jià)偶聯(lián)，使得蛋白樣品與熒光素穩(wěn)定結(jié)合。然后微波或煮沸或者水浴等熱修復(fù)處理，前一輪非共價(jià)結(jié)合的抗體被洗掉，共價(jià)結(jié)合的熒光素穩(wěn)定共價(jià)結(jié)合在樣本切片蛋白上。再換個(gè)一抗來(lái)第二輪孵育，周而復(fù)始。等到所有抗體孵育結(jié)束，熒光素都結(jié)合好后，最后去檢測(cè)結(jié)果。由于每次體系中都只有單一抗體孵育，因此無(wú)需擔(dān)心抗體交叉反應(yīng)，以及一抗二抗種屬匹配問(wèn)題,大大減少了實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)不同種屬抗體選擇匹配的限制。也就是說(shuō)如果用 TSA 技術(shù)，同一張片子上所有的靶標(biāo)都可以選用特異性高的兔單克隆抗體。搭配同一支抗兔的 HRP二抗就可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，而且信號(hào)放大的倍數(shù)大大增強(qiáng)。

n 保存條件：

冰袋（wet ice）運(yùn)輸；4 ℃避光干燥保存，一年內(nèi)使用有效。

n 使用方法：

1.     染色前去除玻片上的 TBST buffer；

2.     配置染料工作液，取1 μL的100X染料母液，使用信號(hào)放大液按1:100稀釋為1X的工作液，信號(hào)放大稀釋液需自備（為1×TBST含0.003 % H2O2：1×TBST100 mL，加入100 μL 3 % H2O2，混勻即可，該稀釋液容易失效，建議現(xiàn)配現(xiàn)用）；

注：本產(chǎn)品的建議稀釋比1:100，實(shí)驗(yàn)者也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果調(diào)整稀釋比例（建議稀釋比例范圍1:50 - 1:500）；

3.     用移液器在玻片上滴加染料工作液100 μL，浸沒(méi)組織區(qū)域。

4.     室溫保濕震蕩孵育10 min。

5.     使用1X的TBST bufer 浸洗玻片，室溫浸片 3 min，重復(fù)三次。

6.     微波修復(fù)（微波中火8 min停火8 min轉(zhuǎn)中低火7 min，去掉已經(jīng)結(jié)合到組織上的一抗二抗，此過(guò)程中應(yīng)防止緩沖液過(guò)度蒸發(fā)，切勿干片），室溫自然冷卻。

7.     滅菌水洗片1次，1X的TBST buffer 浸片2 min。

8.     單染結(jié)束，封片觀察或追加后續(xù)染色。

9.     如進(jìn)行多重?zé)晒鈽?biāo)記，建議先孵育多抗，后孵育單抗；先孵育高豐度目的蛋白對(duì)應(yīng)的抗體，再孵育低豐度目的蛋白對(duì)應(yīng)的抗體。

n 注意事項(xiàng)：

1．本品要避光保存，室溫融化后，使用離心機(jī)進(jìn)行短暫離心，干凈吸頭吹吸混勻后取用；

2．為了您的自身安全，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)做好有效防護(hù)；

3．本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)！