產(chǎn)品規(guī)格
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 售價(jià)（元） |
BLT Trans-D細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑 | TD001 | 50 μL | 250 |
TD002 | 0.75 mL | 890 |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
本產(chǎn)品Trans-D細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑為新一代的陽(yáng)離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑，專用于質(zhì)粒DNA的遞送。可適用眾多易轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的DNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的構(gòu)建。此轉(zhuǎn)染試劑經(jīng)驗(yàn)證在常規(guī)細(xì)胞如Hela，293T、COS7、CHO和B16F10等具有較高的轉(zhuǎn)染效率，對(duì)原代細(xì)胞，干細(xì)胞等難轉(zhuǎn)染細(xì)胞也具有較高的轉(zhuǎn)染效率，與其它轉(zhuǎn)染試劑相比，具有不受血清影響、毒性低、穩(wěn)定性好、轉(zhuǎn)染簡(jiǎn)單易行、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。
保存條件
常溫或冰袋（wet ice）運(yùn)輸；2-8 °C保存，有效期一年（不可冷凍）。
轉(zhuǎn)染實(shí)例對(duì)比
使用說(shuō)明
DNA轉(zhuǎn)染（以24孔板為例）:
（1）細(xì)胞培養(yǎng)：在轉(zhuǎn)染前一天(12-24小時(shí))按照每孔約0.5~1.0*105個(gè)細(xì)胞接種到孔板內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，使第二天細(xì)胞密度能達(dá)到約60-80%。
注：具體的細(xì)胞數(shù)量根據(jù)孔板類型，細(xì)胞類型和細(xì)胞生長(zhǎng)速度等而定，保證細(xì)胞融合度在60%以上。
（2）質(zhì)粒DNA和轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物形成：按照下表對(duì)質(zhì)粒DNA和轉(zhuǎn)染試劑用無(wú)血清培養(yǎng)基或者 Opti-MEM 培養(yǎng)基分別進(jìn)行稀釋，然后將稀釋好的轉(zhuǎn)染試劑盡快全部加入到已稀釋好的質(zhì)粒DNA中，輕輕混勻，室溫復(fù)合10-15 min，混合順序不可反向進(jìn)行。
注：稀釋液需保證無(wú)抗生素和無(wú)血清，復(fù)合物的形成過(guò)程不能含有血清。
| 96-Well | 48-Well | 24-Well | 12-Well | 6-Well | 6cm dish | 10cm dish |
培養(yǎng)液體積 | 0.2 mL | 0.3 mL | 0.5 mL | 0.75 mL | 1 mL | 3 mL | 9 mL |
稀釋液體積 | 10 μL | 25 μL | 40 μL | 60 μL | 0.125 mL | 0.25 mL | 0.5 mL |
DNA/質(zhì)粒用量 | 0.2 μg | 0.5 μg | 1.0 μg | 1.5 μg | 3.0 μg | 3.0 μg | 6.0 μg |
轉(zhuǎn)染試劑用量 | 0.6 μL | 1.5 μL | 3.0 μL | 4.5 μL | 9.0 μL | 18.0 μL | 36.0 μL |
以24孔板為例：①將1.0 μg質(zhì)粒加入無(wú)血清培養(yǎng)液稀釋至40 μL；②將3.0 μL轉(zhuǎn)染試劑加入無(wú)血清培養(yǎng)液稀釋至40 μL；③稀釋好的轉(zhuǎn)染試劑盡快全部加入到已稀釋好的質(zhì)粒DNA中，室溫靜置10-15 min。 |
復(fù)合物加入總量 | 2×10 μL | 2×25 μL | 2×40 μL | 2×60 μL | 2×0.125 mL | 2×0.25 mL | 2×0.5 mL |
注：該表使用量?jī)H供參考，具體使用量還需根據(jù)細(xì)胞類型及其他實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化，對(duì)于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞可通過(guò)改變細(xì)胞密度，DNA濃度，轉(zhuǎn)染試劑濃度對(duì)轉(zhuǎn)染條件進(jìn)行優(yōu)化，轉(zhuǎn)染試劑(μL)：DNA(μg)可以在2:1和5:1之間調(diào)整。
（3）轉(zhuǎn)染培養(yǎng)：將上述80 μL復(fù)合物均勻加入到24孔板中，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)皿或輕微振蕩，繼續(xù)培養(yǎng)18-48小時(shí)后檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，無(wú)需更換培養(yǎng)基。
（4）篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株：轉(zhuǎn)染培養(yǎng)細(xì)胞24 h后，將細(xì)胞傳代至新鮮的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中（將細(xì)胞稀釋10倍以上），在37 °C，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育24 h，加入篩選培養(yǎng)基。在有轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的藥物篩選條件下，約1～2周可篩選到耐藥性克隆，在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
注意事項(xiàng)
1．為了您的自身安全，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)做好有效防護(hù)；
2．形成的轉(zhuǎn)染復(fù)合物勿離心，若想將粘附管壁復(fù)合物離心，請(qǐng)務(wù)必極低轉(zhuǎn)速離心，如50g離心5s；
3．為保證較高的轉(zhuǎn)染效率，請(qǐng)使用高純度、無(wú)菌、無(wú)污染物的質(zhì)粒進(jìn)行轉(zhuǎn)染，通過(guò)260 nm光吸收測(cè)定DNA濃度，260 nm/280 nm 比值確定DNA純度（比值應(yīng)該在1.8～2.0的范圍之內(nèi)；
4．轉(zhuǎn)染試劑可用于有血清培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)染，并且轉(zhuǎn)染前不需要換培養(yǎng)基。但是，制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí)要求用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋DNA和轉(zhuǎn)染試劑，轉(zhuǎn)染時(shí)培養(yǎng)液中不添加抗生素；
5．本品為DNA質(zhì)粒的專用轉(zhuǎn)染試劑，也可以用于RNA的轉(zhuǎn)染，但對(duì)RNA的轉(zhuǎn)染的條件需要摸索，如有需要訂購(gòu)RNA專用轉(zhuǎn)染試劑；
6．本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)！